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本试剂盒适用于从各种哺乳动物全血细胞中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组分，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀、ELISA、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、酶活性分析等下游蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

• 使用方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃保存，开盖使用后-20℃保存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

• 提取液准备：
  每500μL冷的血细胞蛋白提取液中加入1μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶活性等下游实验时，注意据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 取500μL信息抗凝血，3000×g离心10分钟。
  注：
  ● 根据下游蛋白实验应用选择抗凝管，肝素抗凝（绿）、EDTA抗凝（紫）、枸橼酸钠抗凝（浅蓝）均可。
  ● 没有特别要求的一般可以选择枸橼酸钠抗凝管（浅蓝）。
  
• 移除上层血浆，收集下层血液细胞沉淀。
  
• 用PBS洗涤血细胞沉淀2次。
  注：
  ● 2000×g离心5分钟。
  ● 最好采用新鲜血液样本提取血细胞蛋白。如果需要保存，可以离心去除血浆后收集血细胞冻存。-20℃/-80℃冻存均可。长期保存请置-80℃冻存。
  ● 冻存血细胞样本直接加入蛋白提取液提取即可。
  ● 凝血样本用PBS洗涤血凝块一次，1000×g离心5分钟。每100mL血凝块加入0.5mL蛋白提取液，用匀浆器/匀浆机充分匀浆，将匀浆液按下步骤条件振荡。
  
• 加入500μL～1mL冷的蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20～30分钟。
  注：
  ● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件可以不振荡，置4℃静置，稍微延长试剂的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  
• 在4℃，12000～14000×g条件下离心10分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到血细胞总蛋白。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。